एलिसा किट कैसे काम करती है

डबल एंटीबॉडी सैंडविच विधि 1. पैकेज: 0.05MPH9 के साथ। कार्बोनेट पैक को एंटीबॉडी को 1 से 10 ?g/ml की प्रोटीन सामग्री तक पतला करने के लिए बफर किया जाता है। प्रत्येक पॉलीस्टाइरीन प्लेट के प्रतिक्रिया छिद्रों में रात भर में 0.1 मिली, 4 डिग्री सेल्सियस डालें। अगले दिन, घोल को छेद में फेंक दें और इसे हर बार 3 मिनट के लिए वॉशिंग बफर से 3 बार धोएं।

(संक्षिप्त रूप से, धोने के लिए, नीचे भी ऐसा ही है) . 2. नमूना जोड़ें: परीक्षण किए जाने वाले नमूने का एक निश्चित पतलापन ऊपर बताए गए पैक किए गए प्रतिक्रिया छेद में 0.1 मिलीलीटर जोड़ें, 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए सेते हैं। फिर धो लें।

(एक ही समय में ब्लैंक होल, नेगेटिव कंट्रोल होल और पॉजिटिव कंट्रोल होल करें) . 3. एंजाइम जोड़ें {{1}लेबल एंटीबॉडीज: प्रत्येक प्रतिक्रिया छेद में, एक ताजा पतला एंजाइम {{2}लेबल एंटीबॉडी (अनुमापन के बाद कमजोर पड़ने) 0.1 मिली जोड़ें।

37 डिग्री सेल्सियस पर 0.5 से 1 घंटे तक सेते रहें और धो लें।

4. सब्सट्रेट तरल रंग डिस्प्ले जोड़ें: प्रत्येक प्रतिक्रिया छेद में टीएमबी सब्सट्रेट समाधान 0.1 मिलीलीटर, 37 डिग्री सेल्सियस 10 से 30 मिनट की अस्थायी तैयारी जोड़ें।

5. अंतिम प्रतिक्रिया: प्रत्येक प्रतिक्रिया छेद में 2 एम सल्फ्यूरिक एसिड 0.05 मिलीलीटर जोड़ें। परिणाम निर्धारित करें: एक सफेद पृष्ठभूमि पर, सीधे नग्न आंखों से परिणाम देख सकते हैं: प्रतिक्रिया छेद के अंदर का रंग जितना गहरा होगा, सकारात्मक डिग्री उतनी ही मजबूत होगी, नकारात्मक प्रतिक्रिया रंगहीन या बहुत उथली होगी, रंग के अनुसार गहराई में परिलक्षित होता है।

ओडी मान स्कैन किया गया: एलिसा परीक्षक पर, 450 एनएम (यदि बीटीएस रंग प्रतिपादन है, तो 410 एनएम) पर, प्रत्येक छेद के ओडी मान को मापने के लिए खाली नियंत्रण छेद में शून्य डाला जाता है, यदि निर्दिष्ट नकारात्मक नियंत्रण ओडी मान 2.1 गुना से अधिक है, यानी सकारात्मक।

अप्रत्यक्ष कानून

1. ज्ञात एंटीजन को 1 से 10 मिलीग्राम/एमएल, प्रति छेद प्लस 0.1 एमएल, 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर पतला करने के लिए बफर किए जाने वाले पैकेज का उपयोग करें;

2. अगले दिन 3 बार धोएं;

3. उपर्युक्त पैक किए गए प्रतिक्रिया छेद में नमूने (अज्ञात एंटीबॉडी) 0.1 मिलीलीटर का एक निश्चित पतलापन जोड़ें, 37 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए सेते हैं, धो लें;

4. (दोनों रिक्त, नकारात्मक और सकारात्मक छेद नियंत्रण) प्रतिक्रिया छेद में, एक ताजा पतला एंजाइम लेबल दूसरा एंटीबॉडी (एंटी -एंटीबॉडी) 0.1 मिलीलीटर जोड़ें;

5.37 डिग्री सेल्सियस ऊष्मायन 35-60 मिनट, धुलाई;

6.'आखिरी बार जब आप DDW से धोएं। शेष चरण 4, 5, 6 की "डबल एंटीबॉडी सैंडविच विधि" के समान हैं।